Expression of conserved signalling pathway genes during spontaneous vascular differentiation of R1 embryonic stem cells and in Py-4-1 endothelial cells.

Embryonic stem (ES) cells are an invaluable model for identifying subtle phenotypes as well as severe outcomes of perturbing gene function that may otherwise result in lethality. However,though ES cells of different origins are regarded as equally pluripotent,their in vitro differentiation potential varies, suggesting that their response to developmental signals is different. The R1 cell line is widely used for gene manipulation due to its good growth characteristics and highly efficient germline transmission. Hence, we analysed the expression of Notch, Wnt and Sonic Hedgehog (Shh) pathway genes during differentiation of R1 cells into early vascular lineages. Notch-, Wnt- and Shh-mediated signalling is important during embryonic development. Regulation of gene expression through these signalling molecules is a frequently used theme, resulting in context-dependent outcomes during development. Perturbing these pathways can result in severe and possibly lethal developmental phenotypes often due to primary cardiovascular defects. We report that during early spontaneous differentiation of R1 cells, Notch-1 and the Wnt target Brachyury are active whereas the Shh receptor is not detected. This expression pattern is similar to that seen in a mouse endothelial cell line. This temporal study of expression of genes representative of all three pathways in ES cell differentiation will aid in further analysis of cell signalling during vascular development.

Efectos del nivel plasmático de calcio durante el embarazo y la lactancia sobre el remodelado óseo y la resorción / Effect of the level plasma of calcium during the pregnancy and the location bone and the alveolar loss

El propósito de esta investigación fue evaluar el comportamiento de los marcadores sanguíneos del remodelado óseo en el embarazo y la lactancia, y sus efectos sobre el remodelado alveolar y la resorción radicular en el movimiento dental ortodóncico. Se usaron ratas Wistar: 50 hembras de 3 meses de edad y 12 machos de 4 meses de edad. Se establecieron 4 Grupos experimentales: Grupo A (grupo control), Grupo B (Grupo con aparatología ortodóncica), Grupo C (Grupo de gestación y lactancia), Grupo D (Grupo de gestación y lactancia más aparatología ortodóncica). Los Grupos de gestación y lactancia se evaluaron a los 5, 12 y 18 días de gestación y 21 días de lactancia, días que representan las diferentes etapas de cada proceso. A los grupos de aparatología se les colocó un loop ortodóncico durante 3 días, para estudiar la primera fase del movimiento dental. En cuanto a la Bioquímica Sanguínea, se obtuvo que los iones de Calcio, Magnesio y Fósforo disminuyeron en los grupos B, C y D. La actividad enzimática de la fosfatasa alcalina disminuyó en los grupos B y D; aumentó en el Grupo C. En cuanto al análisis histológico, el número de cementoclastos y de vasos sanguíneos disminuyó en el Grupo D. Igualmente el área del ligamento periodontal y de las lagunas de reabsorción disminuyó en el Grupo D. Los resultados demuestran que: 1) la gestación y la lactancia no constituyen estadios fisiológicos contraindicados para la realización del tratamiento de ortodoncia. 2) Los niveles de los marcadores sanguíneos del remodelado óseo varían en cada etapa de gestación y lactancia y disminuyen sus concentraciones con la colocación de aparatología ortodóncica. 3) La gestación y la lactancia aceleran el remodelado óseo lo que favorece el movimiento dental. 4) La resorción radicular es imperceptible en los estadios de gestación y lactancia

Biochemical isolation and identification of microvascular endothelial cells

To overcome the problems commonly involved in the culture of microvascular endothelial cells included unreliable isolation techniques and low cell-yields, a simplified protocol for the selective cultivation of rat heart microvascular endothelial cells [RHMEC], based on the cell specific expression of platelet-endothelial cell adhesion molecule PECAM-1 [CD31], was developed. Subconfluent primary cultures consisted of a mixture of endothelial cells, fibroblasts, and smooth muscle cells were isolated by their selective binding to magnetic beads coupled with anti-PECAM-I monoclonal antibody. After 2 immunomagnetic purification steps, a homogenous population of RHMEC was obtained, which showed typical cobblestone morphology, expressed CD3 1 and Von Willebr and factor proliferated in response to endothelial growth supplement and formed capillary-like tubes in a 3-dimensional ESH-gel matrix. This simple technique might facilitate a more widespread use of microvascular endothelial cell cultures obtained from different human or animal organs for functional in vitro studies